光學顯微鏡的使用方法

光學顯微鏡的使用方法（一）：顯微鏡的主要構造


普通光學顯微鏡的構造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學部分。


1.機械部分
（1）鏡座：是顯微鏡的底座，用以支持整個鏡體。
（2）鏡柱：是鏡座上面直立的部分，用以連接鏡座和鏡臂。
（3）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，是取放顯微鏡時手握部位。
（4）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉換器。
（5）物鏡轉換器(旋轉器)：接于棱鏡殼的下方，可自由轉動，盤上有3－4個圓孔，是安裝物鏡部位，轉動轉換器，可以調換不同倍數的物鏡，當聽到碰叩聲時，方可進行觀察，此時物鏡光軸恰好對準通光孔中心，光路接通。
（6）鏡臺(載物臺)：在鏡筒下方，形狀有方、圓兩種，用以放置玻片標本，中央有一通光孔，我們所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標本推進器(推片器)，推進器左側有彈簧夾，用以夾持玻片標本，鏡臺下有推進器調節輪，可使玻片標本作左右、前后方向的移動。
（7）調節器：是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調節時使鏡臺作上下方向的移動。
①粗調節器(粗螺旋)：大螺旋稱粗調節器，移動時可使鏡臺作快速和較大輻度的升降，所以能迅速調節物鏡和標本之間的距離使物象呈現于視野中，通常在使用低倍鏡時，先用粗調節器迅速找到物象。
②細調節器(細螺旋)：小螺旋稱細調節器，移動時可使鏡臺緩慢地升降，多在運用高倍鏡時使用，從而得到更清晰的物象，并借以觀察標本的不同層次和不同深度的結構。



2．照明部分
裝在鏡臺下方，包括反光鏡，集光器。
（1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉動，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經通光孔照明標本，凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱的時候使用，平面鏡聚光作用弱，適于光線較強時使用。
（2）集光器(聚光器)位于鏡臺下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。
①聚光鏡：由一片或數片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強對標本的照明，并使光線射入物鏡內，鏡柱旁有一調節螺旋，轉動它可升降聚光器，以調節視野中光亮度的強弱。
②光圈(虹彩光圈)：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側伸出一柄，推動它可調節其開孔的大小，以調節光量。



3.光學部分
（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有2－3個，上面刻有5×、10×或15×符號以表示其放大倍數，一般裝的是10×的目鏡。
（2）物鏡：裝在鏡筒下端的旋轉器上，一般有3－4個物鏡，其中*短的刻有“10×”符號的為低倍鏡，較長的刻有“40×”符號的為高倍鏡，*長的刻有“100×”符號的為油鏡，此外，在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線，以示區別。
在物鏡上，還有鏡口率(N.A.)的標志，它反應該鏡頭分辨力的大小，其數字越大，表示分辨率越高，各物鏡的鏡口率如下表：
物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm)
10× 0.25 5.40
40× 0.65 0.39
100× 1.30 0.11
表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(物象調節清楚)時物鏡的下表面與蓋玻片(蓋玻片的厚度一般為0.17mm)上表面之間的距離，物鏡的放大倍數愈大，它的工作距離愈小。
顯微鏡的放大倍數是物鏡的放大倍數與目鏡的放大倍數的乘積，如物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數就為10×10=100。




光學顯微鏡的使用方法（二）：顯微鏡的使用方法



1．低倍鏡的使用方法
（1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊1－2寸為宜，便于坐著操作。
（2）對光：用拇指和中指移動旋轉器(切忌手持物鏡移動)，使低倍鏡對準鏡臺的通光孔(當轉動聽到碰叩聲時，說明物鏡光軸已對準鏡筒中心)。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉向光源，以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時調節反光鏡方向，直到視野內的光線均勻明亮為止。
（3）放置玻片標本：取一玻片標本放在鏡臺上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉推片器螺旋，將所要觀察的部位調到通光孔的正中。
（4）調節焦距：以左手按逆時針方向轉動粗調節器，使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處，應注意在上升鏡臺時，切勿在目鏡上觀察。一定要從右側看著鏡臺上升，以免上升過多，造成鏡頭或標本片的損壞。然后，兩眼同時睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉動粗調節器，使鏡臺緩慢下降，直到視野中出現清晰的物象為止。
如果物象不在視野中心，可調節推片器將其調到中心(注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的)。如果視野內的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節，如果在調節焦距時，鏡臺下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象，說明此次操作失敗，則應重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺。



2．高倍鏡的使用方法
（1）選好目標：一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調到中心，同時把物象調節到*清晰的程度，才能進行高倍鏡的觀察。
（2）轉動轉換器，調換上高倍鏡頭，轉換高倍鏡時轉動速度要慢，并從側面進行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片)，如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調好，應重新操作。
（3）調節焦距：轉換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能見到一個不太清楚的物象，可將細調節器的螺旋逆時針移動約0.5－1圈，即可獲得清晰的物象(切勿用粗調節器!)
如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調節，如果需要更換玻片標本時，必須順時針(切勿轉錯方向)轉動粗調節器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。


3．油鏡的使用方法
（1）在使用油鏡之前，必須先經低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。
（2）將集光器上升到*高位置，光圈開到*大。
（3）轉動轉換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉動油鏡，在轉換油鏡時，從側面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。
（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉動細調節器至物象清晰為止。
如果不出現物象或者目標不理想要重找，在加油區之外重找時應按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區內重找應按：低倍→油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭。
（5）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。




光學顯微鏡的使用方法（三）：顯微鏡使用的注意事項



1．持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。
2．輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。
3．保持顯微鏡的清潔，光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。
4．水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，如果沾污應立即擦凈。
5．放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。
6．要養成兩眼同時睜開的習慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。
7．不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。
8．使用完畢后，必須復原才能放回鏡箱內，其步驟是：取下標本片，轉動旋轉器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實驗臺柜內。*后填寫使用登記表。(注：反光鏡通常應垂直放，但有時因集光器沒提至應有高度，鏡臺下降時會碰壞光圈，所以這里改為平放)

一、光學顯微鏡正確安裝的問題

使用顯微鏡前，首先要把顯微鏡的目鏡和物鏡安裝上去。目鏡的安裝較為簡單，主要的問題在于物鏡的安裝，由于物鏡鏡頭較貴重，萬一安裝時螺紋沒合好，易摔到地上，造成鏡頭損壞，所以為了保險起見，強調操作者在安裝物鏡時要用左手食指和中指托住物鏡，然后用右手將物鏡裝上去，這樣即使沒安裝好，也不會摔到地上。

二、光學顯微鏡正確對光的問題

對光是使用顯微鏡時很重要的一步，有些操作者在對光時，隨便轉一個物鏡對著通光孔，而不是按要求一定用低倍鏡對光。轉動反光鏡時喜歡用一只手，往往將反光鏡扳了下來。所一定要強調用低倍鏡對光，當光線較強時用小光圈、平面鏡，而光線較弱時則用大光圈、凹面鏡，反光鏡要用雙手轉動，當看到均勻光亮的圓形視野為止。光對好后不要再隨便移動顯微鏡，以免光線不能準確地通過反光鏡進入通光孔。

三、光學顯微鏡正確使用準焦螺旋的問題

使用準焦螺旋調節焦距，找到物象可以說是顯微鏡使用中*重要的一步，也是操作者感覺*為困難的一步。操作者在操作過程中極易出現以下錯誤：一是在高倍鏡下直接調焦；二是不管鏡筒上升或下降，眼睛始終在往目鏡中看視野；三是不了解物距的臨界值，物距調到2~3厘米時還在往上調，而且轉動準焦螺旋的速度很快。前兩種錯誤結果往往造成物鏡鏡頭抵觸到裝片，損傷裝片或鏡頭，而第三種錯誤則是操作者使用顯微鏡時*常見的一種現象。針對以上錯誤，操作者要注意，調節焦距一定要在低倍鏡下調，先轉動粗準焦螺旋，使鏡筒慢慢下降，物鏡靠近載玻片，但注意不要讓物鏡碰到載玻片，在這個過程中眼睛要從側面看物鏡，然后用左眼朝目鏡內注視，并慢慢反向調節粗準焦螺旋，使鏡筒徐徐上升，直當看到物像為止。一般顯微鏡的物距在1厘米左右，所以如果物距已遠超過1厘米，但仍未看到物像，那可能是標本未在視野內或轉動粗準焦螺旋速度過快，此時應調整裝片位置，然后再重復上述步驟，當視野中出現模糊的物像時，就要換用細準焦螺旋調節，只有這樣，才能縮小尋找范圍，提高找到物像的速度。

四、光學顯微鏡物鏡轉換的問題

使用低倍鏡后換用高倍鏡，操作者往往喜歡用手指直接推轉物鏡，認為這樣比較省力，但這樣容易使物鏡的光軸發生偏斜，原因是轉換器的材料質地較軟，精度較高，螺紋受力不均勻很容易松脫。一旦螺紋破壞，整個轉換器就會報廢。操作者應手握轉換器的下層轉動板轉換物鏡。

五、光學顯微鏡正確用眼的問題

用顯微鏡觀察物體時，應雙眼同時睜開，左眼往目鏡內注視。但有不少操作者往往做不到這一點，喜歡用手捂住右眼或干脆閉上右眼，這是不符合實驗的觀察要求的，這種**習慣會造成左眼疲勞，同時也不能做到邊觀察邊畫圖。應該注意，左眼要盡量貼近目鏡，右眼試圖向視野內注視，如此反復訓練，就會達到雙目同時睜開觀察的要求。或者也可以通過做以下練習：睜開雙眼，用一張紙或手掌豎立在兩眼之間，鼻子跟前，使左右眼不能互看對側一邊，然后有意識地先看左邊，再看右邊，如此3~5次，每天早晚各做一遍，不到一星期便可學會。